在生物技術(shù)領(lǐng)域，常使用親和色譜法進行病毒、蛋白的純化。親和色譜法屬于吸附色譜法的一種，目標(biāo)物質(zhì)有選擇地吸附于色譜柱填料的配體上，然后通過更改緩沖液達(dá)到分離、回收的目的。使用親和色譜法回收目標(biāo)成分，可以比凝膠過濾或離子交換色譜法的精度高出很多。
QuikSep Sulfate是一種特定的親和填料，適用于部分病毒、病毒樣顆粒以及某些特定的抗原和蛋白（見表2）的分離純化。
特點：
1.?????? 快速、簡單（一步純化）。
2.?????? 載量高。
3.?????? 易于放大。
表1：性能參數(shù)
介質(zhì) | QuikSep Sulfate |
基質(zhì) | 高剛性瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90μm |
溶菌酶載量 | ≥3mg/ml 介質(zhì) |
pH穩(wěn)定性 | 5-12（長期） 5-12（短期） |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
流速 | （16mm× 300mm，0.1MPa）300cm/h |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
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表2：QuikSep Sulfate適用性
Viruses | Viral/Microbial Agents |
Rabies Influenza ? Japanese ? Enchephalitis Feline ? Leukemia Feline ? Herpes Feline ? Calicivirus Respiratory ? Syncytial Virus Human ? Herpes Simplex Human ? Measles Human ? Parainfluenza | Herpes ? Simplex gA and gB Glycoprotein Subunits Hepatitis ? B Surface Antigen Filamentous ? Hemagglutinin from B. pertussis Leucocytosis ? Promoting Factor Hemagglutinin |
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QuikSep Sulfate純化狂犬病毒層析工藝
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1. 層析柱
介質(zhì)：QuikSep Sulfate； 規(guī)格：1ml 預(yù)裝柱
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2. 樣品預(yù)處理
高倍濃縮后的樣品用平衡液稀釋 20 倍，上樣前 0.45um 過濾，0.45um 過濾。
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3. 緩沖液
A：10mM PB，pH 7.2； B：10mM PB，1M NaCl，pH 7.2。
備注：所有溶液需 0.45um 過濾。
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4. 純化過程
流速：1ml/min 或者 30cm/h；
平衡：溶液 A 平衡 10CV（CV 指柱體積，下同）；
上樣：上樣 30CV；
清洗：溶液 A 平衡 10CV；
洗脫：溶液 B 洗脫 10CV，收集洗脫液。
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5. 純化圖譜
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5. 檢測結(jié)果
體積 （ml） | 蛋白濃度 （ug/ml） | 抗原含量 （IU/ml） | 蛋白去除率 （%） | 收率 （%） | 濃縮倍數(shù) | 純化倍數(shù) | |
原液 | 30 | 615 | 1.51 | 94 | 75.4 | 11 | 13 |
流穿液 | 30 | 557 | 0.22 | ||||
洗脫液 | 2 | 531 | 17.08 |
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7. 結(jié)論
該懸浮培養(yǎng)狂犬病毒純化工藝中，病毒與 QuikSep Sulfate進行吸附結(jié)合，洗脫液中蛋白去除率≈94%，回收率≈75.4% 。
8. 訂購信息
產(chǎn)品 | 規(guī)格(ml) | 貨號 |
QuikSep Sulfate | 25 | HZ1010-1 |
QuikSep Sulfate | 100 | HZ1010-1 |
QuikSep Sulfate | 500 | HZ1010-1 |
QuikSep Sulfate | 1000 | HZ1010-1 |
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