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第七期 Cellufine凝膠過濾填料

2019年07月30日source:管理員
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Cellufine凝膠過濾,或尺寸排阻,是一種簡單、高效的層析方法,用于蛋白或生物大分子的純化。但是,大多數(shù)凝膠過濾填料都只能在低流速下使用,且分辨率十分有限,因而,很難實現(xiàn)高通量的大規(guī)模的制備工作。


Cellufine GCL-2000,一種球形纖維素基的凝膠過濾填料,克服了傳統(tǒng)凝膠過濾填料的缺陷,機械穩(wěn)定性良好,分辨率高,因而,可在高流速下使用,更可用于大規(guī)模工業(yè)化柱的裝填和操作。


Cellufine GCL-2000,可用于分離分子量范圍分布很寬的復雜組分,特別適合于高分子量蛋白復合體的組分分離。


Cellufine GH-25,一種多孔的球形高交聯(lián)度纖維素基凝膠過濾填料,可用于蛋白的快速除鹽。3kD的排阻極限使得蛋白等大分子可以直接通過柱體,而小分子的鹽類溶解物在通過柱體的同時,則還需經(jīng)過填料內(nèi)部的孔隙,滯后了洗脫的時間,從而達到了蛋白和鹽類溶解物的分離。Cellufine GH-25,具有良好的機械穩(wěn)定性,因而可在高流速下使用,不僅可用于裝填大直徑的制備柱,而且還大大減少了蛋白制備所需的時間。


按照涂層種類來分,默克的 TCL 板有以下五種:

1.Sillica gel 60 以及 Sillica gel 60 F254 ,此為硅膠板,TCL 中超過 90%的應用是硅膠板;

其中 60 代表涂層的硅膠孔徑為 60;F254 表示涂層中含有熒光指示劑,此熒光指示劑在254nm 紫外光下發(fā)射綠光;此外,默克還有標識為 F254S 的薄層板,它在 254nm 紫外光下發(fā)射藍光。

2.改性硅膠板,RP-8,RP-18,NH2,CN,DIOL。

RP-8,RP-18 是反相薄層板,其色譜行為和HPLC 的反相填料相近。但是在使用普通的反相 TLC 板時,展開劑中的水含量不得超過 40%(這是由于發(fā)生毛細作用的填料孔的潤濕性有限);如果需要更高的水含量作展開劑,需

要選擇 RP-18W 的反相薄層板,這種涂層具有低的鍵合度,涂層表面有更多的殘余硅羥基。DIOL 板和硅膠板的選擇性非常相近,它具有比硅膠板弱的保留,而且分離不受相對濕度的影響。NH2 板適合于分離糖以及糖的衍生物,羥基化合物可以非常方便地在氨基板上檢測出來(在加熱的情況下形成了發(fā)藍色熒光的加合物)。

CN 板越來越多地用于正相分離,使用正己烷和極性有機改性劑作展開劑;同時,CN 板也可以用于反相色譜分離。

3.Cellulose (F),纖維素板,適合于分離強極性的化合物如兒茶酚,食物色素以及氨基酸。

4.Aluminum Oxide,氧化鋁板,默克提供堿性和中性氧化鋁板,所有的玻璃板全部為堿性氧化鋁板,酸性氧化鋁板可以通過使用酸性展開劑用中性氧化鋁板制備。

5.Polyamide,聚酰胺薄層板。

按薄層板的基材來分可以分為玻璃板,鋁板和塑料板,其中鋁板由于其方便裁剪,價格便宜贏得用戶的青睞。

按薄層板涂層厚度來分,也可以說是按照分離的目的來分類,可以分為普通板(涂層厚度為0.20mm 或 0.25mm)和制備板(涂層厚度為0.5mm/1.0mm/1.5mm/2.0mm)。其中普通板用于獲得樣品的組成信息,而制備板用于純化樣

品以獲得高純度的產(chǎn)品,涂層的厚度可以根據(jù)待分離樣品量的進行選擇。


薄層板的保存及使用注意事項


薄層板代表著一個開放的系統(tǒng),容易受到周圍環(huán)境的影響。如果板在儲存過程中保存不當,非常容易受到濕度、灰塵和煙霧的污染。同時,由于 TCL 離線操作的特性,在每個獨立的步驟(點樣、展開、顯色衍生以及分離結(jié)果評價)都要手工操作,因此需要特別小心以避免破壞 TCL敏感的涂層。

我們建議:在取拿薄層板時只拿板的邊緣,而不是觸及涂層表面,如果有需要,展開好的板子應該僅僅拿捏溶劑前沿的那個邊緣。薄層板上的污染物不僅僅是富集的周圍空氣中雜質(zhì),薄層板的收縮性薄膜包裝也是雜質(zhì)的一個

來源。因此儲存在原始包裝的泡沫塑料盒中的最上面一塊板子應該涂層朝下放置。如果我們發(fā)現(xiàn)板在紫外光下有暗的溶劑前沿,應該考慮在使用前將板子“預清洗”(一般選擇甲醇或三氯甲烷或二者的混合溶液進行預清洗)。?


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